Автор неизвестен - Анатолій якович циганенкодо 75-річчя від дня народження - страница 13

Страницы:
1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39  40  41  42  43  44  45  46  47  48  49  50 

Материал и методы. В качестве микробио­логических объектов использован набор рефе­рентных штаммов, в том числе S. aureus АТСС 25923, B. subtilis АТСС 3333, E. coli АТСС 25922, Ps. aeruginosa АТСС 22853, C. albicans АТСС 10261. Для оценки уровня минималь­ной ингибирующей активности исследуемых препаратов использован метод двукратных се­рийных разведений в соответствующей жид­кой питательной среде, а для выявления ми­нимальной бактерицидной концентрациивысевы на плотную питательную среду из про­бирок с визуально отсутствующим микроб­ным ростом [8]. Селективный потенциал срав­ниваемых препаратов оценен путем 25-крат­ного непрерывного последовательного куль­тивирования тест-штаммов в присутствии в питательной среде постоянных или возрас­тающих субактивных концентраций иссле­дуемого препарата [9].

Химиотерапевтическая активность разра­ботанного антисептика аспарцида изучена на модели генерализованной инфекции белых мышей, воспроизведенной внутрибрюшинным заражением взвесью суточной агаровой куль­туры S. aureus в смеси с «голодным» агаром.

Результаты и их обсуждение. Технологи­ческую основу производства эктерицида соче-танно характеризуют параллельно осуществ­ляемые процессы водного гидролиза и окис­ления рыбьего жира кислородом воздуха пу­тем принудительного поддува из глубины или периодического шюттелирования. Такая тех­нология обеспечивает при экспозиции в тече­ние 25-30 суток при 38-40 °С ограниченное насыщение водной фазы физиологического раствора хлорида натрия экстрагируемыми низшими дикарбоновыми кислотами и соот­ветствующими им альдегидами и органиче­скими перекисями.

В целях повышения микробоцидных свойств целевого продукта с безуспешными результа­тами испытаны такие модификации, как удво­енное использование навески рыбьего жира, за­мена водного гидролиза омылением, мягким или жестким кислотным гидролизом. Более того, при микробиологическом тестировании установлено, что в результате омыления едкой щелочью или гидролиза рыбьего жира неорга­ническими или органическими кислотами це­левой продукт не только снижает, но и утра­чивает регламентную микробоцидную актив­ность. Последнее, как установлено результата­ми химического анализа, обусловлено нерегу­лируемым метаболизмом экстрагируемых жирных кислот до производных, не обладаю­щих микробоцидными свойствами. В связи с изложенным необходимо было разработать но­вый способ получения антисептика на основе субстратного использования рыбьего жира.

На основании экспериментально-теорети­ческого анализа в качестве фактора направ­ленного, регулируемого образования полу­продуктов рыбьего жира обосновано исполь­зование кислых аминокислот, основными представителями которых являются аспара-гиновая и глутаминовая. При этом учтено, что кислым аминокислотам присущи низкие зна­чения рН, достаточные для управляемого гид­ролитического воздействия на исходный суб­страт рыбьего жира. Далее, этим аминокисло­там свойственны глюкогенные эффекты в ре­гуляции углеводно-липидного обмена, что применительно к разрабатываемому способу может учитываться как стабилизирующий фактор равновесной системы между экстраги­рованными в водную фазу жирными кислота­ми, органическими перекисями и альдегида­ми. Наконец, собственными исследованиями впервые установлен широкий спектр выра­женных микробоцидных свойств кислых ами­нокислот [10]. В результате при гидролитиче­ском воздействии на субстанцию рыбьего жи­ра аспарагиновой кислотой разработан анти­септик аспарцид, сочетающий в проявлениях микробоцидной активности действие полу­продуктов субстрата и аминокислоты.

Антибактериальные свойства аспарцида изучены в сравнении с эктерицидом по дейст­вию на 158 референтных и клинических штам­мов, относящихся к 13 видам патогенных и ус­ловно-патогенных микроорганизмов (табли­ца). Установлено, что разработанный антисеп­тик аспарцид как минимум на порядок превы­шает микробоцидные свойства препарата срав­нения. Прежде всего отмечается достаточно выраженная антисептическая активность ас-парцида по отношению к грамположительным и грамотрицательным условно-патогенным микроорганизмам, отличающимся природно-заданными уровнями антибиотикорезистент-ности. Бактерицидное действие аспарцида на эту группу микроорганизмов выявлено в пре­делах разведений 1:25,7 - 1:44 и по абсолют­ным уровням превышало действие эктерици-да в 21 раз, вульгарного протея в 24,5 раз, ми-рабильного протея в 17 раз, кишечной палоч­ки в 17,6 раз, стафилококка в 58 раз и стрепто­кокков в 38 раз (таблица).

При действии на возбудителей кишечных инфекций аспарцид в 5 раз превышал актив­ность препарата сравнения в отношении S. typhi и в 15 раз — в отношении Sh. flexneri. Следует также отметить данные, свидетельст­вующие о достаточно выраженной бактерицид­ной активности аспарцида в отношении мико-бактерий туберкулеза, дифтерийных палочек, гонококков и менингококков (таблица).

Несмотря на то, что в результате проведен­ных исследований установлена избирательная микробоцидная активность аспарцида, не ис­ключалось, что в результате иррационального применения разработанный антисептик мог реализовать возможный селективный потен­циал в формировании устойчивых микробных вариантов. В этой связи проведена серия иссле­дований по 25-кратному селективному культи­вированию двух штаммов S. aureus и двух штаммов Pr. mirabilis (соответственно по одной чувствительной и устойчивой к антибиотикам микробной культуре) при постоянном присут­ствии в питательной среде субактивной кон­центрации антисептика. Итоговое сопоставле­ние уровней чувствительности к аспарциду ме­жду исходными и пассированными варианта­ми микробных культур не выявило статисти­чески значимых расхождений. Это подтвер­ждает отсутствие регистрируемых селектив­ных свойств у исследуемого антисептика.

В продолжение тестирования антимикроб­ных свойств аспарцида изучена зависимость выраженности специфической активности пре­парата от показателей антибиотикорезистент-ности тест-микробов. В опыте использованы ре­ферентные и соответственно устойчивые к тет­рациклину, левомицитину, мономицину, не-омицину, олеандомицину, ристомицину, поли-миксину, бензилпенициллину клинические штаммы S. aureus и Pr. mirabilis. Установлено, что аспарцид не обнаруживает значимых отли­чий в уровнях действия на сравниваемые по ан-тибиотикограммам микробные культуры.

Таким образом, на основании результатов испытания специфической активности аспар-цида in vitro можно заключить, что разработан­ный препарат характеризуется широким спек­тром антимикробной активности, проявляемой преимущественным микробоцидным действи­ем вне зависимости от показателей антибиоти-корезистентности микробных культур.

Экспериментальная химиотерапия убеди­тельно свидетельствует об имеющихся несоот­ветствиях в сопоставительной оценке резуль­татов, полученных in vitro и in vivo. С учетом

Сравнительная характеристика спектров и уровней бактерицидной активности

эктерицида и аспарцида

Тест-микроб

Кол-во штаммов

Уровень бактерицидного действия, разведения

Кратность активностей

 

 

эктерицид

аспарцид

 

Ps. aeruginosa

9

1,22±0,27

25,7±7,6

21

Pr. vulgaris

8

1,12+0,26

27,50±8,86

24,5

Pr. mirabilis

10

1,81±0,41

30,80±7,49

17

B. subtilis

11

Не активный

26,60±6,03

26,6

E. coli

10

1,90±0,38

33,60±5,56

17,6

Sh. flexneri

8

1,87±0,63

29,00±8,77

15,5

S. typhi

12

1,50±0,15

7,60±0,91

5

Vibrio

8

2,60±0,42

38,00±6,03

14,6

N. intracellulare

7

3,14+0,40

18,80±4,83

5,9

N. gonorrhoeae

10

4,60±0,60

92,8±21,1

20

Staphilococcus

16

0,750±0,035

44,00±7,38

58,6

Streptococcus

13

Натурный

38,10±5,29

38,1

M. tuberculosis

12

2,83±0,93

32,00±6,14

11,3

C. diphtheriae

24

3,03±0,52

74,5±18,8

21,1

ответствующий продромальной стадии в фор­мировании септикопиемии, протективный эффект аспарцида соответствовал защите 60 % животных от гибели в результате разви­тия септикопиемии, а при однократном внут­ривенном введении препарата через 12 часов после заражения при клинических признаках септикопиемии — 30 %.

Выводы

1. Установлено, что представители кис­лых аминокислот обладают умеренно выра­женными микробоцидными свойствами.

2. Разработан способ получения антисеп­тика аспарцида на основе гидролитического и глюкогенного воздействия на рыбий жир ас-парагиновой кислоты.

3. В проявлениях антимикробных свойств аспарцид характеризуется широким спектром микробоцидных свойств вне зависимости от показателей антибиотикорезистентности тест-микробов.

4. На моделях локализованной и генера­лизованной гнойной инфекции белых мышей аспарцид выявляет выраженные лечебно-про­филактические свойства.

этого запланировано испытание химиотера-певтической активности аспарцида на моде­ли генерализованной стафилококковой ин­фекции белых мышей. Выбор именно этого вида экспериментальной септикопиемии про­диктован тем, что, в отличие от препарата сравнения, аспарцид in vitro проявляет выра­женную микробоцидную активность в отно­шении пиогенных кокков. Лечение животных проведено путем однократного внутривенно­го введения аспарцида в дозе 0,5 мл на разных стадиях инфицированности и формирования септикопиемии, в том числе одновременно с заражением, через 6 и через 12 часов после за­ражения. Химиотерапевтическая активность аспарцида оценена на основании учета пока­зателей выживаемости, суммарной продол­жительности жизни, выраженной в мыше-днях, результатов высеваемости возбудителя из крови и висцеральных органов животных.

Результаты проведенных исследований показали, что при одновременном с заражени­ем введении аспарцида лечебно-профилакти­ческий эффект проявлялся предупреждением от гибели 90 % животных. При лечении через 6 часов после заражения, то есть в период, со-

Список литературы

1. Навашин С.М., Фомина И.П. Современная антибиотикотерапия бактериальных инфекций — состояние и перспективы развития. Химиотерапия бактериальных инфекций. М., 1989: 72-74.

2. Гречко В.А. Антибиотикочувствительность штаммов возбудителей, выделенных от больных с гнойно-воспалительными процессами. Провизор 1999; 1: 52-53.

3. Сидоренко С.В. Перспективы контроля распространения антибиотикорезистентности. Антибио­тики и химиотерапия 1998; 43, 7: 3-6.

4. Красильников А.П. Справочник по антисептике. Минск: Вышэйшая школа, 1995. 367 с.

5. Антисептики в профилактике и лечении инфекций. Под ред. Г.К. Палия. К.: Здоров'я, 1997. 197 с.

6. Современная фитотерапия. Под ред. В. Петкова. София, 1988. 503 с.

7. Дикий И.Л., Черкас Г.П., Овчаренко О.И., ДикаяЕ.М. Клинико-бактериологическая оценка те­рапевтической эффективности препарата эктерицида в патологии гнойно-воспалительных процессов. Стафилококковые инфекции: Мат. III Межвуз. конф. Л., 1972: 68-69.

8. Дикий И.Л., Сидорчук И.И., Холупяк И.Ю. Микробиология. Руководство к практическим за­нятиям. Харьков: Изд. НФаУ, «Золотые страницы», 2002. 441 с.

9. Першин Г.Н. Методы экспериментальной химиотерапии. М.: Медицина, 1971. 539 с.

10. Дубинина Н.В., Холупяк И.Ю. Антимикробный потенциал некоторых аминокислот. Эксперим. и клин. медицина 2002;3: 75-76.

АНТИМІКРОБНІ ВЛАСТИВОСТІ ТА ХІМІОТЕРАПЕВТИЧНА АКТИВНІСТЬ НОВОГО АНТИСЕПТИКА АСПАРЦИДУ ПРИ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНІЙ ГНІЙНІЙ ИНФЕКЦІЇ І.Л. Дикий, Н.І. Філімонова, Н.В. Дубініна

Розроблений спосіб одержання антисептика аспарциду на основі гідролітичної та глюкогенної дії на субстрат риб'ячого жиру аспарагінової кислоти. Препарат «Аспарцид» має широкий спектр мікробоцидних властивостей без залежності від показників антибіотикорезистентності мікроорганіз­мів, а на моделях локалізованої та генералізованої гнійної інфекції білих мишей виявляє виражену лікувально-профілактичну активність.

Ключові слова: ектерицид, аспарагінова кислота, аспарцид, мікробоцидна дія, гідроліз.

ANTIMICROBIAL PROPERTIES AND CHEMOTHERAPEUTIC ACTIVITY OF THE NEWS ANTISEPTIC ASPARACIDUM AT THE EXPERIMENTAL PURULENT INFECTION

I.L. Dikiy, N.I. Filimonova, N.V. Dubinina

It was developed the new method of creation of antiseptic asparacidum at base of hydrolytic and gluco­genic effect on substrat of cod-liver oil by asparaginic acid. The asparacidum is differing by broad spectrum out of dependence from signs of microorganism's antibiotic resistance. It is discover the evident medicinal-preventive activity at the models of localized and generalized purulent infection of white mice.

Key words: ectericidum, asparaginic acid, asparacidum, microbocidic effect, hydrolysis.

БАКТЕРІОВИДІЛЕННЯ У ЗІСТАВЛЕННІ З ЕЛЕКТРОКІНЕТИЧНИМИ ВЛАСТИВОСТЯМИ КЛІТИННИХ ЯДЕР

У ХВОРИХ НА ТУБЕРКУЛЬОЗ ЛЕГЕНЬ

С.І. Зайцева, Ю.М. Пашков, Л.П. Ющенко,

Т.Г. Герасимова, С.Л. Матвеева, О.В. Сасова

Харківський державний медичний університет

Обстежено 92 хворих на туберкульоз легень без деструктивних змін: 40 вперше виявлених хворих, що раніше не одержували хіміотерапію, і 52 пацієнти з вперше виявленим обмеже­ним деструктивним процесом, що загоївся до моменту обстеження під впливом анти-мікобактеріальної терапії. Бактеріоскопічне та бактеріологічне дослідження виконано в поєднанні з біопробою і з вивченням електрокінетичних властивостей клітинних ядер. Ви­явлено бактеріовиділення майже в 1/4 хворих, каверна у яких загоїлась. Незважаючи на наявність чи відсутність бактеріовиділення у всіх хворих виявлено ознаки активності ту­беркульозного процесу, які підтверджені дослідженням електрокінетичних властивостей клітинних ядер. Установлена необхідність продовження антимікобактеріальної терапії у даної категорії хворих не менш ніж на 2-4 місяці після загоєння деструкцій. Ключові слова: активність туберкульозного процесу, бактеріовиділення, антиміко-бактеріотерапія.

Одним з важливих діагностичних і прогно­стичних показників при туберкульозі легень є бактеріовиділення. В останні роки виникли певні труднощі у виявленні виділень мікобак­терій туберкульозу. Це зумовлено збільшен­ням серед уперше виявлених хворих числа осіб з мізерним бактеріовиділенням, а також гли­бокими змінами властивостей збудника під впливом туберкулостатичних засобів [1-3]. У зв'язку з цим проста мікроскопія стає менш інформативною, особливо при обстеженні хво­рих без деструктивних змін у легенях.

Метою даної роботи є вивчення можливо­стей виявлення бактеріовиділення з викори­станням комплексу бактеріологічних і біоло­гічних методів дослідження у хворих на тубер­кульоз легень без деструктивних змін та зі­ставлення цього показника з показниками, що характеризують активність туберкульоз­ного процесу. Як один із показників, що характеризує активність процесу, вивчали електрокінетичні властивості ядер букально-го епітелію до та після введення двох туберку­лінових одиниць (2 ТО).

Матеріал і методи. Обстежено 92 пацієн­ти, що розділені на дві групи. У 1-шу групу ввійшли 40 хворих із вперше виявленим ту­беркульозом без деструктивних змін, що не одержували раніше антимікобактеріальні препарати; 2-гу групу склали 52 хворих із вперше виявленим обмеженим деструктив­ним процесом, який на момент обстеження загоївся під впливом антимікобактеріальної терапії, яка проводилась у відповідності зі стандартними схемами ВООЗ. У 13 пацієнтів порожнини розпаду загоїлись через 2 міс лі­кування, у 39 — через 4 міс.

Хворих відбирали за негативними резуль­татами багаторазового бактеріоскопічного дослідження (не менше трьох порцій мокро­тиння, при його відсутності — промивних вод бронхів). Досліджували 4 мазки, пофарбовані за Цилем-Нильсеном, і 3 мазки методом кіль­кісної оцінки масивності бактеріовиділення. Посіви проводили на середовища Левенштей-на-Йенсена і Фінн-II.

При негативній бактеріоскопії добове мок­ротиння заливалося рівним об'ємом 10%-во-го Na3PO4 і поміщалось у термостат при темпе­ратурі 37 °С на 20 год. Потім матеріал центри­фугувався, з осадку готувалася суспензія для інтратестикулярного введення двом-трьом морським свинкам, з них одній-двом вводи­лося щодня 2,5 мг адрезону протягом 14 днів. Свинка, що не одержувала адрезон, була кон­тролем. Всього було заражено 267 тварин. Умертвлялись морські свинки ефіром для наркозу на 60-й день з моменту зараження.

При морфологічному вивченні органів ек­спериментальних тварин специфічні зміни оці­нювали за інтенсивністю запального процесу (виражені і незначні). За виражені туберкульоз­ні зміни приймалися генералізація процесу і наявність альтеративно-ексудативних змін у різних органах. Незначні туберкульозні зміни характеризувались наявністю в сім'яниках дрібних ділянок некрозу, що були оточені гігантськими клітинами типу клітин сторонніх тіл. При цьому вогнищ казеозного некрозу у внутрішніх органах морських свинок не було.

Страницы:
1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39  40  41  42  43  44  45  46  47  48  49  50 


Похожие статьи

Автор неизвестен - 13 самых важных уроков библии

Автор неизвестен - Беседы на книгу бытие

Автор неизвестен - Беседы на шестоднев

Автор неизвестен - Богословие

Автор неизвестен - Божественность христа