Автор неизвестен - Анатолій якович циганенкодо 75-річчя від дня народження - страница 17

Страницы:
1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39  40  41  42  43  44  45  46  47  48  49  50 

Проблемы современной фармакотерапии бронхиальной астмы (БА) у детей во многом сводятся к созданию эффективных лекарст­венных форм, обеспечивающих доставку пре­паратов в бронхолегочную систему, не затра­гивая другие органы и системы [1, 2].

В настоящее время нет ни одного антибак­териального препарата, который мог бы эф­фективно использоваться в комплексной те­рапии БА у детей, не вызывая побочных эф­фектов, приводящих к развитию дисбиотиче-ских процессов в бронхолегочной системе, и уже на новой этиологической основе вызывать рецидив заболевания.

Перспективным направлением в решении проблемы этиотропной терапии БА у детей яв­ляется использование в качестве лекарствен­ных форм фосфатидилхолиновых липосом (липина), представляющих собой ограничен­ные объемы, возникающие путем самосборки амфифильных липидных комплексов, в кото­рые могут быть включены лекарственные пре­параты [3].

К преимуществам липосом как лекарст­венной формы относятся:

возможность включения малораствори­мых и токсичных веществ;

особая совокупность биологических свойств, характерных для функций клеточных мембран;

определенная фармакодинамика в орга­низме с последовательным распределением и накоплением в органах и тканях, в том числе и в бронхолегочной системе;

биологическая совместимость с ферментами и иммунологическими системами организма;

адгезивность;

особый характер взаимодействия с клет­ками в виде эндоцитоза или прямого слияния с их мембранами и др. [4, 5].

Взаимодействие липосом с клетками во многом объясняет их способность преодоле­вать некоторые анатомо-физиологические барьеры организма и обеспечивать направлен­ный транспорт в патологический очаг. Ни од­на из других лекарственных форм подобной биологической способностью не обладает.

Липосомы представляют собой замкнутые бислойные везикулы, мембраны которых со­стоят из упорядоченно расположенных фос-фолипидов. Такое строение липосом позволя­ет взаимодействовать с мембранными струк­турами соматических клеток органов и сис­тем, а также с бактериальными клетками. Ли-посомы значительно снижают явления отека и альтерации бронхолегочных структур при воспалительных процессах и способны подав­лять рост условно-патогенной микрофлоры, что позволяет рассматривать их в качестве перспективных противовоспалительных и ан­тимикробных средств [2, 5].

Целью настоящей работы явилось изуче­ние антимикробных свойств липина на услов­но-патогенные и патогенные микроорганиз­мы, выделенные из бронхолегочного секрета детей с БА.

Материал и методы. Для оценки антибак­териальных свойств липина (фосфатидилхо-лина) на микроорганизмы, представленные Staphylococcus aureus, Pseudomonas aerugi­nosa, Escherichia coli и Proteus mirabilis, ко­торые выделены из бронхолегочного секрета от 114 детей в возрасте от 3 до 11 лет с БА, и определения динамики роста исследуемых культур и МПК липосом проведена серия опы­тов с применением метода серийных разведе­ний липосомальных суспензий в жидкой пи­тательной среде. При этом концентрация ли-пидов в ряду пробирок составляла 25,0; 12,5;

6,2; 3,1; 1,5 и 0 (контроль) мкг/мл. В качест­ве питательных сред использовали 0,15 М рас­твор хлорида натрия. В каждую пробирку с питательной средой и взвесью фосфатидилхо-линовых липосом вносили исследуемую сус­пензию выделенных из бронхолегочного сек­рета бактериальных клеток с концентрацией 1 млрд микробных тел/мл из расчета 0,1 мл суспензии на 1 мл среды инкубации. Инкуба­цию смеси проводили в термостате ТС-80М2 при 37 °С. По истечении срока инкубации (18, 24, 48 и 72 ч) высевали исследуемую суспен­зию штрихом на сектор поверхности МПА. Степень роста бактериальных культур оцени­вали по пятибалльной шкале через 18-24 ч ин­кубации при 37 °С. МПК определяли через 24 ч инкубации.

Результаты и их обсуждение. На протяже­нии всего периода инкубации исследуемых культур S. aureus, P. aeruginosa, E. coli и P. mirabilis в 0,15 М растворе натрия хлори­да, несмотря на отсутствие питательных ве­ществ, наблюдался обильный рост колоний после высева на твердую питательную среду.

Через 18 ч инкубации культур P. aerugi-nosa, E. coli и S. aureus с суспензией липосом отсутствие роста отмечалось при концентраци­ях липосомальной суспензии 25,0; 12,5 и 6,2 мкг/мл. Продление сроков инкубации до 24 ч позволило уменьшить бактерицидную концентрацию липосом для Staphylococcus au-reus до 3,1 мкг/мл, для других тестовых куль­тур этот показатель остался без изменений. Че­рез 48 ч совместной инкубации липосом с бактериальными клетками было отмечено дальнейшее уменьшение бактерицидной кон­центрации липосомальной суспензии до 1,5 мкг/мл для Staphylococcus aureus и до 3,1 мкг/мл для P. aeruginosa и E. coli. К концу периода наблюдения для всех исследуемых микроорганизмов бактерицидной оказалась минимальная использованная концентрация липосом (до 1,5 мкг/мл).

Несколько иным был результат липосом с культурой P. mirabilis, выделенной из брон-холегочного секрета детей с БА. Так, отсутст­вие бактериального роста было отмечено при концентрациях исследуемого препарата 25,0; 12,5; 6,2 и 3,1 мкг/мл уже через 18 ч их со­вместной инкубации.

При использовании в качестве среды ин­кубации 20%-ного раствора плазмы крови здорового ребенка бактерицидный эффект ли-посом применительно к S. aureus, P. aerugi-nosa, E. coli оказался менее выраженным. Так, через 18 ч взаимодействия бактерицидной для этих культур оказалась только концентрация препарата 25,0 мкг/мл. При продолжении сроков инкубации до 48 ч уменьшение бакте­рицидной концентрации до 12,5 мкг/мл бы­ло зарегистрировано только для культуры S. aureus, а для остальных культур этот пока­затель остался прежним. В конце периода на­блюдений эти показатели также не измени­лись.

Несмотря на то, что суспензия P. mirabi-lis в 0,15 М растворе натрия хлорида оказалась более чувствительной к действию липосом, чем другие микроорганизмы, в 20%-ном рас­творе плазмы крови здорового ребенка бакте­рицидный эффект проявлялся в более поздние сроки. Отсутствие роста этой культуры было отмечено только через 24 ч инкубации при концентрации препарата 25,0 мкг/мл. При продлении сроков инкубации уменьшение бактерицидной концентрации липосом также не наблюдалось.

Мы предположили, что бактерицидный эффект липосом может быть связан, с одной стороны, со свойствами используемых липи-дов, с другой — с их упорядоченным располо­жением в составе бислойной липосомальной мембраны. Для подтверждения данного пред­положения была проведена серия опытов, в которых в качестве препарата использовали эмульгированную смесь фосфатидилхолина и холинестерина в том же молярном соотноше­нии. Условия проведения опытов оставались прежними. Исследования показали, что в от­личие от липосом суспензия нелипосомаль-ных форм липидов в изотоническом растворе хлорида натрия оказывала бактерицидное действие на клетки S. aureus в концентраци­ях 25,0; 12,5 и 6,2 мкг/мл только через 48 ч инкубации. При меньших сроках инкубации отмечалось лишь слабое подавление роста этой культуры. На клетки используемых грамотрицательных палочек липиды в нели-посомальной форме на протяжении всего пе­риода наблюдения бактерицидного действия не оказывали. Только к концу третьих суток отмечалось умеренное подавление роста бак­териальных культур при концентрации липи-дов в суспензии 25,0 мкг/мл. При добавлении плазмы крови здорового ребенка в среду ин­кубации липиды подавляющего действия на рост всех используемых бактериальных куль­тур вообще не оказывали.

Снижение бактерицидного эффекта липо-сом после добавления в среду инкубации плаз­мы крови может быть связано как с действи­ем компонентов плазмы на мембраны липо-сом, так и с воздействием на метаболизм бак­териальных клеток. В первом случае измене­ние свойств липосомальных мембран может быть следствием сорбционной активности ли-посом по отношению к белковым компонен­там плазмы крови здорового ребенка и про­дуктам их деградации. К тому же компонен­ты плазмы вызывают резкое увеличение про­ницаемости липосом, что приводит к их раз­рушению. Во втором случае добавление в сре­ду инкубации питательных веществ, содержа­щихся в плазме, также может оказывать бла­гоприятное действие на скорость репродукции исследуемых микроорганизмов.

Таким образом, проведенные исследова­ния показали, что липин (фосфатидилхолин) оказывал прямое антибактериальное действие на основные виды условно-патогенных мик­роорганизмов, выделенных из бронхолегочно-го секрета детей, больных БА.

При ингаляционном применении липина в дозе 5-10 мкг/кг через ультразвуковой ин­галятор 3 раза в день в течение 8-10 дней на­ступало клиническое улучшение в виде сня­тия бронхоспазма, исчезновение сухих сви­стящих хрипов, экспираторной одышки, нор­мализации частоты дыхания, а также улучше­ние показателей функции внешнего дыхания.

При проведении бактериологических ис­следований бронхолегочного секрета у детей, больных БА, отмечено единичное присутствие колоний грамположительных и грамотрица-тельных бактерий, не проявляющих фермент­ной активности.

Механизм бактерицидного действия ли­пина может реализоваться путем взаимодей­ствия липосом с клеточными рецепторами, последующим изменением метаболизма бак­териальных клеток в результате воздействия на них продуктов окисления липосомальных липидов и их цитотоксического действия на клетки микроорганизмов.

Выводы

1. Липин (фосфатидилхолин) оказывает прямое бактерицидное действие на условно-патогенные и патогенные микроорганизмы, выделенные из бронхолегочного секрета де­тей, больных бронхиальной астмой.

2. Выраженность бактерицидного эффек­та находится в прямой зависимости от дозы используемого препарата и времени его воз­действия на микроорганизмы.

3. В генезе бактерицидного действия ли-посом существенное значение имеет упорядо­ченная структура липосомальных мембран, поскольку использование липидов того же со­става в нелипосомальной форме значительно снижает бактерицидный эффект.

4. Ингаляционное применение липосо-мального препарата липина в дозе 5-10 мг/кг массы тела на одну ингаляцию 3 раза в день в течение 8-10 дней вызывает бактерицидное действие по отношению к условно-патоген­ным и патогенным организмам в бронхолегоч-ной системе у детей, больных бронхиальной астмой.

Список литературы

1. Просолова Н.И., Агранат В.З., Балюра А.В. Применение липосом в лечении бронхиальной аст­мы. Национальный конгресс по болезням органов дыхания: Тез. докл. М., 1995: 105.

2. Новикова Р.И., Черный В И., Стефанов А.В., Ахламова Ю.И. Липосомы в комплексном лече­нии больных с хроническим обструктивным бронхитом. Тер. архив 1993; 3: 40-43.

3. Корбинский Г.Д. Липосомы транспортеры лекарств (Новое в жизни, науке и технике. Сер. «Медицина»). М., 1998; 2: 27-32.

4. Технологические основы получения и перспективы клинического применения липосом: Метод. рекомендации. Сост. И.Л. Дикий, Л.С. Стрельников, В.И. Чуешов и др. К. Р МК МЗ УССР, 1989. 25 с.

5. Березовская Л.Н., Грязнов Н.С. Проблемы создания липосомальных лекарственных форм ан­тибиотиков. Антибиотики и химиотерапия 1990; 10: 31-35.

АНТИБАКТЕРІАЛЬНА АКТИВНІСТЬ ЛІПОСОМАЛЬНОГО ПРЕПАРАТУ «ЛІПІН» ПРИ ІНГАЛЯЦІЙНОМУ ЛІКУВАННІ ДІТЕЙ, ХВОРИХ НА БРОНХІАЛЬНУ АСТМУ Ю.В. Одинець, В.Г. Чернуський, І.Л. Дикий

Представлені дані про інгаляційне використання ліпосомального препарату «Ліпін» у комплекс­ному лікуванні 114 дітей, що страждають на бронхіальну астму, у віці 3-14 років. Показано вплив ліпіну на етіологічні фактори розвитку цього захворювання, а також продемонстрована його перева­га над іншими засобами, що використовуються в лікуванні бронхіальної астми.

Ключові слова: ліпосоми, лікування, бронхіальна астма, мікробіоценоз, мікрофлора бронхіального секрету, колонізаційна резистентність.

ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF LIPOSOMAL FORM «LIPIN» AT TREATMENT OF CHILDREN

WITH BRONCHIAL ASTHMA

Yu.V. Odynets, V.G. Chernuskiy, I.L. Dikiy

Data about the inhalational use of liposomal form «Lipin» in complex treatment of 114 children suf­fering from bronchial asthma aged 3-14 years have been produced. It was shown the influence of «Lipin» on etiological factors of development of the disease and there were presented its advantages over other forms of medications used in the treatment of bronchial asthma.

Key words: liposomes, treatment, bronchial asthma, microbiocenosis, microflora of bronchial secret, colonizational resistance.

СПЕЦИФИЧЕСКАЯ СЕРОДИАГНОСТИКА ЭПШТЕЙН-БАРР-ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ У БОЛЬНЫХ С ДЛИТЕЛЬНЫМ СУБФЕБРИЛИТЕТОМ

И ЛИМФАДЕНОПАТИЕЙ НЕЯСНОЙ ЭТИОЛОГИИ

Л.А. Панченко, Н.В. Павленко, Е.А. Радченко, Ю.П. Мостовый, Н.Г. Попова, В.В. Казмирчук

Институт микробиологии и иммунологии им. И.И. Мечникова АМН Украины, г. Харьков

При иммуноферментном исследовании сывороток крови 36 больных, страдающих дли­тельным (более трех месяцев) субфебрилитетом и лимфаденопатией невыясненной при­роды, в 52,8 % случаев выявлена EBV-инфекция: у 1/3 из них установлена затянувшаяся стадия реконвалесценции, у 2/3 — хроническая форма заболевания. Ключевые слова: Эпштейн-Барр вирус (EBV), герпес-вирус 4-го типа (HHV-4), имму-ноферментный анализ.

В инфекционной патологии человека все большее значение приобретает Эпштейн-Барр-вирусная инфекция (EBV-инфекция) или гер­пес-вирус человека 4-го типа (HHV-4) [1]. В связи с широким распространением во всем мире и высокой инфицированностью (более 95 %) взрослого населения EBV имеет и дру­гое неофициальное название — «вирус каждо­го человека» (от англ. «every body's virus») [2].

Первоначально после открытия EBV (1964) считалось, что он вызывает только инфекци­онный мононуклеоз (ИМ), протекающий с ли­хорадкой, болью в горле и лимфаденопатией. Наиболее часто ИМ встречается в юношеском возрасте и у молодых взрослых, у которых пер­вичное заболевание обычно протекает асимпто-матически или в виде легкой и средней тяже­сти [3]. Это обстоятельство, а также высокий уровень серопозитивных лиц среди здоровых взрослых объясняют безуспешность поиска в течение многих лет этиологического агента ИМ, клиническая картина заболевания кото­рого была описана еще в конце XIX ст. русским клиницистом Н.Ф. Филатовым [4].

После первичной EBV-инфекции обычно устанавливается характерная для всех герпес-вирусов латентная (бессимптомная) форма ин­фекции, во время которой вирус под влияни­ем различных провоцирующих факторов мо­жет активизироваться и вызвать клинически выраженное заболевание. Чаще активизация вируса происходит на фоне нарушения им­мунного статуса организма [3].

Важной особенностью EBV является его спо­собность к иммортализации В-лимфоцитов, то есть способность вызывать их неопределенно долгое деление и превращать в лимфобластоид­ные клетки с передачей приобретенных новых свойств последующим генерациям клеток. Ре­зультатом этого является развитие лимфопро-лиферативных заболеваний (лимфомы Беркит-та, назофарингеальной карциномы, лимфом у HIV-инфицированных лиц и др.) [1-3].

Таким образом, высокая степень асимпто-матического хронического носительства EBV и его онкогенный потенциал ввиду способно­сти к индуцированию злокачественной транс­формации В-лимфоцитов крови определяют актуальность проведения более широких ис­следований по выявлению EBV-инфекций.

В настоящее время для диагностики EBV-инфекции используется ряд методов, позво­ляющих выявлять антигены или геном виру­са, а также специфические к нему антитела в сыворотке крови больных. Среди диагности­ческих тестов наибольшее распространение получил метод иммуноферментного анализа (ИФА), направленный, чаще всего, на выяв­ление специфических антител — маркеров острой и реконвалесцентной инфекции. Для их выявления используются очищенные ре-комбинантные антигены вируса. Ввиду отсут­ствия отечественных тест-систем для диагно­стики используются зарубежные (США, Фран­ция), а также российского производства. До­роговизна зарубежных диагностических набо­ров позволяет осуществлять лабораторную ди­агностику EBV-заболеваний только в крайне ограниченном объеме. Недавно сотрудниками отдела молекулярной биологии вирусов Института микробиологии и вирусологии им. Д.К. Заболотного НАН Украины (г. Киев) было сообщено о разработке отечественной тест-системы «ИФА-Ат ВЭБ-стрип», в кото­рой использован экстракт лимфобластоидных клеток В95-8, трансформированных EBV и хронически продуцирующих его антигены [5, 6]. Испытание тест-системы показало, что по специфичности и чувствительности она не ус­тупает зарубежным аналогам. Но пока толь­ко предстоит ее промышленный выпуск, и только в перспективе можно будет надеяться на широкое использование отечественных на­боров в диагностических целях и проведение исследований по изучению уровня циркуля­ции EBV среди населения Украины.

Страницы:
1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39  40  41  42  43  44  45  46  47  48  49  50 


Похожие статьи

Автор неизвестен - 13 самых важных уроков библии

Автор неизвестен - Беседы на книгу бытие

Автор неизвестен - Беседы на шестоднев

Автор неизвестен - Богословие

Автор неизвестен - Божественность христа