Автор неизвестен - Анатолій якович циганенкодо 75-річчя від дня народження - страница 18

Страницы:
1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39  40  41  42  43  44  45  46  47  48  49  50 

Целью настоящего исследования была специфическая серодиагностика EBV-инфек-ции у лиц с длительным субфебрилитетом и лимфаденопатией неясной этиологии.

Материал и методы. Исследованию были подвергнуты сыворотки крови больных, стра­дающих длительным субфебрилитетом (t= 37,0-37,5 °C в течение трех и более месяцев), а также лимфаденопатией, природу которой выяснить не удалось.

Для установления перенесенной EBV-ин-фекции была использована диагностическая тест-система «Векто-ВЭБ-NA-IgG-стрип» про­изводства «Вектор-Бест» (Россия), предназна­ченная для выявления IgG к ядерному анти­гену (EBNA-1, p 72).

Результаты ИФА регистрировали с помо­щью спектрофотометра путем измерения опти­ческой плотности (ОП) на длине волны 450 нм. Учет производили, если среднее значение ОП отрицательной контрольной сыворотки (ОПс К-) не превышало 0,200 оптических еди­ниц (о.е.), а среднее значение ОП положитель­ной контрольной сыворотки (ОПср К+) в три и более раза превышало ОПср К-. Положитель­ной считали сыворотку крови, если ее значе­ние ОП было равным или превышало ОП кри­тическое (ОП ). ОП определяли по фор­муле ОП    = ОП К-+0,1.

крит ср

Для установления роли EBV при длитель­ном субфебрилитете и лимфаденопатии было обследовано 36 больных, из них 11 детей в воз­расте 7-12 лет и 25 взрослых в возрасте 25­40 лет.

Результаты и их обсуждение. Исследова­ния показали, что у 22 больных (6 детей и 16 взрослых) в течение длительного времени (более трех месяцев) температура была 37,0­37,5 °C. Обычно она повышалась в утренние часы и реже в полдень. Каких-либо других признаков заболевания, кроме недомогания и слабости, больные не отмечали. У двух взрос­лых лиц были увеличены только лимфатиче­ские узлы (у одного — подмышечные и у дру­гого — паховые), у 12 больных (5 детей и 7 взрослых) субфебрилитет сочетался с лим-фаденопатией. В основном были увеличены в отдельности или вместе передние и задние шейные лимфоузлы, подчелюстные, которые не были спаяны между собой, кожей и подле­жащими тканями, в большинстве безболез­ненные или слегка болезненные. Ни у одного из наблюдаемых больных не было отмечено каких-либо изменений в крови. Печень и се­лезенка увеличены не были. Реакция Пауль-Буннеля на наличие гетерофильных антител, основанная на способности сывороток крови больных агглютинировать бараньи эритроци­ты, как известно, служила в течение долгого времени основным лабораторным тестом под­тверждения клинического диагноза острого ИМ. Ни у одного пациента с изложенными жа­лобами она не была поставлена ввиду отсут­ствия характерных для острого ИМ симпто­мов. При этом была учтена не только нецеле­сообразность постановки данного теста, но и его ненадежность, особенно при EBV-инфек-ции у детей [3]. Кроме того, отмечено до 30 % ложноположительных результатов реакции при некоторых других инфекциях и ряде за­болеваний, сопровождающихся лихорадкой. Поэтому для установления перенесенной в прошлом EBV-инфекции был использован им-муноферментный тест по обнаружению IgG к ядерному антигену EBNA-1, p 72.

Результаты иммуноферментной детекции IgG к ядерному EBV-антигену, который яв­ляется маркером ранее перенесенной EBV-ин-фекции, у больных с длительным субфебри­литетом и лимфаденопатией неясной этиоло­гии представлены в таблице.

Как видно из приведенных в таблице дан­ных, у 4 из 11 детей (36,4 %) в возрасте от 7 до 12 лет, страдающих длительным субфебрили­тетом и лимфаденопатией, были обнаружены IgG к EBNA-1, p 72, в том числе у трех в вели­чинах ОП, превышающих в два и более раза показатель ОП контроля.

У 15 из 25 взрослых больных (60,0 %) в ос­новном с длительной субфебрильной темпера­турой (10 из 16 больных) или сочетаемой с лимфаденопатией (3 из 7 больных) также бы­ли обнаружены IgG к ядерному EBV-антиге-ну, в том числе у 10 больных с высокими по­казателями ОП.

Учитывая возможность развития не толь­ко острых, но и подострых форм заболевания, а также хронического течения с неярко выра­женными клиническими и гематологическими особенностями, часто даже с отсутствием наи­более значимых признаков, мы рекомендуем для уточнения этиологического диагноза забо­левания шире использовать определение мар­керов EBV-инфекции у больных с длительным субфебрилитетом и лимфаденопатией.

Анализ результатов иммуноферментного исследования 36 сывороток крови больных, страдающих в течение длительного времени

Обнаружение IgG к ядерному белку (EBNA-1, p 72) в сыворотках крови больных, страдающих длительным субфебрилитетом и лимфаденопатией неясной этиологии

Контингент и количество обследованных больных

Обнаружены IgG к EBNA-l,p72,a6c.4.

Вт.ч.с превышением ОП * по сравнению с ОП^К" в число раз

 

 

1,5

2

>2

Дети 7-12 лет:

 

 

 

 

с субфебрилитетом (п=6)

0

 

 

 

сочетание субфебрилитета с лимфаденопатией (п=5)

4

1

2

1

Всего 11

4(36,4%)

1

2

1

Взрослые:

 

 

 

 

с субфебрилитетом (п=16)

10

3

5

2

с лимфаденопатией (п=2)

2

1

1

 

сочетание субфебрилитета с лимфаденопатией (п=7)

3

1

1

1

Всего 25

15(60,0%)

5

7

3

* ОП

оптическая плотность.

(более трех месяцев) субфебрилитетом и лим-фаденопатией неустановленной этиологии, позволяет считать что в 52,8 % случаев они были вызваны EBV.

Количественный уровень IgG к ядерному EBV-антигену может рассматриваться как по­казатель затянувшейся стадии реконвалесцен-ции при ОП исследуемой сыворотки, в 1,5 раза превышающей показатель ОП контрольной сы­воротки. При более высоких показателях ОП (в 2 и более раза превышающих ОП отрицатель­ной сыворотки) имеет место хроническое тече­ние заболевания, вызванного персистирую-щим с периодической активизацией герпес-ви­русом 4-го типа.

Выводы

1. При иммуноферментном исследовании сывороток крови больных с длительным (более трех месяцев) субфебрилитетом и лимфадено-патией неустановленной природы у 19 из 36 (52,8 %) обнаружены IgG к ядерному EBV-ан-тигену.

2. У 6 из 19 больных (31,6 %) IgG к ядер­ному EBV-антигену в величинах оптической плотности в 1,5 раза превышал аналогичный показатель в контроле, что расценено как след­ствие затянувшейся стадии реконвалесценции после перенесенной ранее EBV-инфекции.

3. Обнаружение IgG к ядерному EBV-ан-тигену в количествах оптической плотности, в 2 и более раза превышающих оптическую плотность в контрольной сыворотке, у 13 из 19 больных (68,4 %) свидетельствует о хрони­ческом течении заболевания, вызванного пер-систентно циркулирующим с периодической активацией Эпштейн-Барр вирусом.

4. Проведенные исследования подтвер­ждают целесообразность проведения, наряду с тщательным клиническим и гематологиче­ским обследованием больных, вирусологиче­ского исследования на Эпштейн-Барр вирус для уточнения этиологической природы забо­левания у лиц с длительным субфебрилитетом и лимфаденопатией.

^доок литературы

1. Sandstrom E., Witley R.J. The increasing importance of Cytomegalovirus, Epstein-Barr virus and Human herpesvirus types 6, 7 and 8. Recommendations from the IHMF Management Strategies Workshop and 3rd Annual Meeting. IHMF International Herpes Management Forum, 17-19 November 1995: 1-12.

2. Andersson J. An overview of Epstein-Barr virus from discovery to future directon for treatment

and prevention. Herpes 7: 2000; 3: 76-82.

3. Vinnie G.B. Mononucleoses and Epstein-Barr virus infection. Medicine specialties, 2002 April 3. P.

85-90.

4. Филатов Н.Ф. Лекции об острых инфекционных заболеваниях у детей. М., 1908. 540 c.

5. Загородня С.Д. Розробка специфічних компонентів імуноферментної тест-системи для визна­чення антитіл до вірусу Епштейн-Барр та характеристика її параметрів. Автореф. дис. ... канд. мед.

наук. К., 2003. 20 с.

6. Держпатент України 40966 А. Тест-система для виявлення антитіл проти вірусу Епштейна-Барр «ИФА-Ат ВЕБ-стрип». Загородня С.Д., Дяченко Н.С., Нестерова Н.В. та ін. 15.08.2001. Бюл. № 7.

СТІЕЦИФІЧНА СЕРОДІАГНОСТИКА ЕПШТЕЙН-БАРР-ВІРУСНОЙ ІНФЕКЦІЇ У ХВОРИХ З ТРИВАЛИМ СУБФЕБРИЛІТЕТОМ І ЛІМФАДЕНОПАТІЄЮ НЕЯСНОЇ ЕТІОЛОГІЇ

Л.О. Панченко, Н.В. Павленко, О.О. Радченко, Ю.П. Мостовий, Н.Г. Попова, В.В. Казмірчук

При імуноферментному дослідженні сироваток крові 36 хворих, що страждають тривалим (більше трьох місяців) субфебрилітетом і лімфаденопатією нез'ясованої природи, у 52,8 % випадків виявле­на EBV-інфекція: у 1/3 з них установлена тривала стадія реконвалесценції, у 2/3 — хронічна форма захворювання.

Ключові слова: Епштейн-Барр вірус (EBV), герпес-вірус 4-го типу (HHV-4), імуноферментний аналіз.

SPECIFIC SEROLOGICAL DIAGNOSTIC OF EPSTEIN-BARR VIRUS INFECTION AT THE PATIENTS WITH PROTRACTED SUBFEBRILE CONDITION AND LYMPHADENOPATHY WITH UNCLEAR ETIOLOGY L.A. Panchenko, N.V. Pavlenko, E.A. Radchenko, Yu.P. Mostovyi, N.G. Popova, V.V. Kazmirchuk

At immunoenzyme research of serums of a blood for 36 patients suffering by protracted (more than 3 months) subfebrile condition and lymphadenopathy with unclear etiology, in 52,8 % of cases the EBV-infection was detected. For 1/3 of them the protracted stage of a reconvalescence, and for 2/3 patientsthe chronic form of disease were determined.

Key words: Epstein-Barr virus, Human Herpesvirus type 4 (HHV-4), immunoenzyme test.

ВЛИЯНИЕ ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТИ ХРАНЕНИЯ ВИРУСОВ В УСЛОВИЯХ УМЕРЕННО НИЗКИХ ТЕМПЕРАТУР НА ИХ УЛЬТРАСТРУКТУРУ И БИОЛОГИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ

М.Ю. Стегний

Национальный фармацевтический университет, г. Харьков

Путем сравнительного изучения биологической активности, морфологии и ультраструк­туры вирусов парагриппа и диареи крупного рогатого скота, подвергавшихся замора­живанию, долгосрочно и кратковременно хранившихся при -18 °С, показано, что дли­тельное хранение исследованных вирусных суспензий не обеспечивает сохранности их биологической активности и ультраструктуры на исходном уровне. Поэтому данный ре­жим консервирования может использоваться для временной, непродолжительной ста­билизации вирусного материала.

Ключевые слова: вирусы парагриппа, вирусы диареи, хранение, умеренно-низкие тем­пературы.

Анализ существующих средств и методов длительного сохранения биологического ма­териала показывает, что для хранения кол­лекционных штаммов микроорганизмов и штаммов, используемых в биотехнологии промышленного производства вакцин, анти­генов, диагностических препаратов, все чаще применяют низкотемпературное консервиро­вание (-165, -196 °С) [1, 2] и лиофилизацию [2, 3]. В то же время для сохранения вирусов и вируссодержащего материала до сих пор очень широко используют умеренно низкие температуры (-18 ... -20 °С) [4].

Целью данной работы было выяснение эф­фективности хранения вирусных суспензий парагриппа-3 (ПГ-3) и диареи (ВД) крупного рогатого скота при умеренно низких темпера­турах путем сравнительного изучения биоло­гической активности, морфологии и ультра­структуры вирусов, подвергавшихся замора­живанию, долгосрочно и кратковременно хра­нившихся при температуре -18 °С.

Материал и методы. Исследовали 7 образ­цов вируса ПГ-3, производственные штаммы М-87, ЗКСМ и эталонный SF-4; 3 образца ВД, эталонные штаммы «Орегон С24^», эпизо­отический «УНДІЕВ-25».

Вирусы были предоставлены Украинским НИИ экспериментальной и клинической вете­ринарной медицины УААН. Вируссодержа-щий материал, полученный после полного раз­рушения перевиваемых клеточных культур трахеи теленка, почки овцы, коронарных со­судов теленка, замораживали и хранили в хо­лодильнике при температуре -18 °С. Переви­ваемые культуры клеток выращивали в пита­тельной среде следующего состава: по 45 % сре­ды Игла и 199 с добавлением 10 % инактиви­рованной сыворотки крупного рогатого скота. В поддерживающую среду после заражения клеточных культур сыворотку крови не вноси­ли. Время хранения вирусного материала при -18 °С составляло от 3 мес до 11 лет. Восстанов­ление биологической активности вирусов изу­чали по цитопатическому действию (ЦПД) пу­тем их культивирования в течение одного пас­сажа на чувствительных перевиваемых клеточ­ных культурах. Инфекционную активность ви­русных суспензий определяли методом титро­вания по ЦПД вирусов на все названные выше перевиваемые клеточные культуры.

Электронно-микроскопические исследо­вания проводили на микроскопе ПЭМ-125К методами негативного контрастирования и тонких срезов. При этом размороженный ви-руссодержащий материал концентрировали, очищали от клеточного детрита центрифуги­рованием на RSF6 при 50 с-1 в течение 10 мин. Затем полученные вирусные супернатанты осаждали на ультрацентрифуге MSE при +4 °С и 1300 с-1 в течение одного часа.

Для приготовления препаратов вируса ме­тодом негативного контрастирования полу­ченные в результате ультрацентрифугирова­ния осадки ресуспендировали в небольшом объеме дистиллированной воды, наносили на сеточки с формваровой пленкой, контрасти­ровали уранилацетатом по стандартной мето­дике [5] с последующим просмотром в элек­тронном микроскопе. В случае приготовления препаратов методом тонких срезов получен­ные после ультрацентрифугирования осадки не ресуспендировали, а подвергали двойной фиксации глутаральдегидом и четырехоки-сью осмия с последующей проводкой по стан­дартной методике [5].

Результаты и их обсуждение. Данные по выявлению инфекционной активности ис­следованных штаммов вирусов представлены в табл. 1.

Как следует из данных табл. 1, инфекци­онная активность не была обнаружена у про­изводственных штаммов М-87 вируса пара­гриппа, хранившихся в течение 14 и 15 лет в условиях умеренно низких температур. Не на­блюдалось цитопатических изменений в пер­вом пассаже вируса на клеточной культуре поч­ки овцы у штамма ЗКСМ, который находился в данных условиях 11 лет. Признаки ЦПД бы­ли обнаружены после проведения 15 пассажей вируса на упомянутой культуре клеток. При этом титр инфекционной активности данного штамма составил 10-3,5 по сравнению с исход­ным 10-4. Эталонный штамм SF-4 также инак-тивировался в процессе хранения. Попытка восстановить этот штамм оказалась успешной лишь после проведения 18 пассажей на клеточ­ной культуре коронарных сосудов теленка. В данном случае титр инфекционной активности восстановленного штамма составил 10-2.

Значения титров инфекционной активно­сти штаммов вирусов с выявленной инфекци-онностью представлены в табл. 2.

Полученные данные свидетельствуют о том, что хранение вирусов ПГ-3 при -18 °С в течение года ведет к снижению их инфекци­онной активности на 85 с-1 по сравнению с ис­ходной. Титр инфекционной активности при десятикратных разведениях вируса показал нулевые значения. ЦПД вируса на клеточную культуру выявляется только в случае высокой множественности ее заражения большим объ­емом вируссодержащих суспензий, хранив­шихся при умеренно-низких температурах.

Электронно-микроскопическим исследо­ваниям подвергались все образцы вируссодер-жащего материала с выявленной инфекцион-ностью. Однако обнаружить вирусные части­цы удалось только в образцах, которые хра­нились в данных условиях в течение 3 мес. На электронограммах вируса ПГ-3 (рис. 1, а и б) видны полиморфные вирионы в форме непра­вильных сфер диам. от 130 до 240 нм. Эти ви-

Страницы:
1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39  40  41  42  43  44  45  46  47  48  49  50 


Похожие статьи

Автор неизвестен - 13 самых важных уроков библии

Автор неизвестен - Беседы на книгу бытие

Автор неизвестен - Беседы на шестоднев

Автор неизвестен - Богословие

Автор неизвестен - Божественность христа